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【资料页数】977页 (大16开 A4纸)
【资料内容】制造工艺及配方
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1 犬瘟热病毒纳米抗体及其应用
可用于检测犬瘟热病毒的纳米抗体,所述的抗体与犬瘟热病毒具有良好的亲和性,可以极其快速地检测出血液中犬瘟热病毒或其N蛋白,同时能够使得犬瘟热病毒检测用的配对抗体的制备变得容易,所制备的试剂盒成本更低,且更易于储藏和运输;本发明的试剂盒可以灵敏检测犬瘟热病毒抗原,重复性好,结果稳定,方便快捷,纳米抗体生产成本低且易于获得。
2 狐源犬瘟热病毒强毒HBF-1株的感染性cDNA克隆及反向遗传系统的建立
反向遗传操作系统拯救获得的重组病毒rHBF‑1与亲本病毒wtHBF‑1相比具有相似的生长特性,且大小、形态与典型的犬瘟热病毒的一致。本发明的提出为狐源犬瘟热病毒强毒HBF‑1株的拯救以及深入探索犬瘟热病毒的致病致弱分子机制提供了基础和技术手段。
3 用于检测犬瘟热病毒的抗体对及其应用
抗体对能特异性识别犬瘟热病毒,在抗原试纸条实验中最低检测1000个TCID50/mL犬瘟热病毒,在双抗体夹心法ELISA实验中最低检测400个TCID50/mL犬瘟热病毒,识别特异性高,且不与其他病毒反应。
4 培养犬瘟热病毒和犬细小病毒的方法及应用
通过生物反应器进行犬瘟热病毒和犬细小病毒的培养,以Vero细胞作为犬瘟热病毒的宿主,以F81细胞作为犬细小病毒的宿主在片状载体上进行培养,生产得到的犬瘟热病毒和犬细小病毒滴度高,批间差异小,产品质量稳定。
5 一株嵌合犬瘟热病毒株及其构建方法和应用
将狐源犬瘟热病毒强毒HBF‑1的H基因替换为疫苗毒Onderstepoort的H基因,通过病毒拯救获得了一株嵌合犬瘟热病毒株rHBF‑vacH,该病毒可在Vero‑dSlam中稳定传代,且病毒滴度稳定达到107.0TCID50/ml,超过亲本毒株的105.0TCID50/ml,未来应用于犬瘟热病疫苗开发将会具有极大优势。
6 一种利用生物反应器制备犬瘟热病毒单克隆抗体的方法
该方法提高了犬瘟热病毒单克隆抗体的效价,无需浓缩,克服了传统腹水生产抗体的缺点,使抗体产品无杂蛋白,产品稳定,批间差异小。
7 多配体蛋白聚糖4的siRNA序列在抑制犬瘟热病毒复制中的应用
实验证明,SDC4 siRNA转染对细胞毒性低,不会影响细胞正常存活与增殖,并且能够明显抑制SDC4的表达水平,病毒复制水平也明显下降。因此,本发明的提出为犬瘟热的防控提供了一种新的、有效的技术手段。
8 鉴别犬瘟热病毒野毒株和疫苗株的引物、探针及应用
引物探针构建的复合荧光定量PCR方法能快速、有效的鉴别犬瘟热病毒(CDV)野毒株和疫苗株,具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点。
9 一种犬瘟热弱毒株及其制备的疫苗组合物和应用
具有良好的免疫原性,遗传稳定,低毒,制备的活疫苗能预防和治疗犬瘟热,针对流行株进行保护,并能对多种动物进行保护。
10 用于扩增犬瘟热病毒结构蛋白基因的通用引物组及其应用
该通用引物组能够实现不同宿主来源的犬瘟热病毒结构蛋白基因的有效扩增,大大提高了获得病毒结构基因序列的效率,缩短了病毒含量极低样品中获得犬瘟热病毒其他未知毒株结构基因序列的时间。有助于明确CDV适应细胞前后病毒各个结构蛋白核苷酸序列变异情况,追溯其变异来源及规律,为寻找犬瘟热病毒野毒关键毒力位点提供技术手段。
11 犬用犬瘟热、细小病毒病二联灭活疫苗及其制备方法
使用本发明的二联灭活疫苗接种犬未见任何不良反应发生;效力试验表明,单剂量接种疫苗后6个月内,可使犬免于犬瘟热、细小病毒病检验用强毒的攻击,获得保护。本发明的二联灭活疫苗采用犬瘟热病毒和犬细小病毒灭活工艺,可用于同时预防犬的犬瘟热、细小病毒病二种疾病,实现“一针防两病”,具有广阔的应用前景。
12 鉴别水貂犬瘟热病毒、水貂细小病毒、水貂阿留申病毒及伪狂犬病毒的四重PCR引物组
还公开了含有上述引物组的试剂盒并建立了相关的多重PCR检测方法。本发明建立的多重PCR检测方法简单,检测速度快且批量大、特异性好、准确性高、重复性好,可以准确、快速、高通量的进行临床样本的检测,也可应用于宠物犬、雪貂及狐狸、貉病毒病的检测。
13 犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗耐热保护剂及其制备方法和应用
原料易得、制备方法简单,在配制犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗时可以有效降低冷冻干燥过程中各病毒抗原的损失,可确保犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗的免疫效力和长期稳定保存。
14 犬瘟热病毒犬细小病毒犬传染性肝炎病毒三联活疫苗
微生物保藏号为CGMCC No.19398的犬细小病毒疫苗株和微生物保藏号是CGMCC No.19396的犬传染性肝炎病毒疫苗株。该疫苗株组合中的三种疫苗毒株毒力低,免疫原性良好。本发明还公开了以前述疫苗株组合为免疫原的活疫苗组合物。该疫苗组合物安全有效。
15 快速检测犬瘟热病毒(CDV)的RDA方法及试剂盒
提供的试剂盒可省去核酸提取步骤,在恒温条件下20min内实现犬瘟热病毒(CDV)的检测,特异性为100%,与普通PCR方法相比,RDA荧光法在恒温下反应,不需变温,不需复杂仪器,而且反应时间短,适用于现场快速检测。本发明的方法及其试剂盒具有操作简单、快速、特异性好、灵敏度高、成本低廉等特点,可为犬瘟热病毒(CDV)现场快速检测筛查提供有效的技术手段,具有广阔的应用前景。
16 绿原酸在制备预防和/或治疗犬细小病毒病和犬瘟热的药物或饲料添加剂中的用途
药物对犬细小病毒病痊愈率为67%,显效率为33%,总有效率为100%;施用本发明以绿原酸作为唯一活性成分制得的药物后,患犬瘟热的病犬体温、精神、食欲和粪便状态均明显改善,本发明的药物对对犬瘟热的痊愈率为58%,显效率为25%,总有效率为83%。绿原酸作为唯一活性成分在制备预防和/或治疗细小病毒病和犬瘟热的药物或饲料添加剂中具有良好的应用前景。
17 一种犬瘟热病毒疫苗株、疫苗及其制备方法
其微生物保藏号是CGMCC No.19397。该疫苗株毒力低,免疫原性良好。本发明还公开了以前述犬瘟热疫苗株为免疫原的活疫苗组合物。该疫苗组合物安全有效。
18 放线菌酮在制备治疗犬瘟热病药物中的用途
放线菌酮能显著改善犬瘟热病毒导致的正常Vero细胞病变,且对Vero细胞无明显毒性作用,其对犬瘟热病毒的抑制EC50值为1.429μM。因此,放线菌酮在抑制犬瘟热病毒方面效果确切,可单独或与其它抗犬瘟热病毒药物组合后用于制备犬瘟热病毒抑制剂或犬瘟热病治疗药物。
19 霉酚酸或其衍生物在制备犬瘟热病毒抑制剂中的用途
结果表明:霉酚酸能显著改善犬瘟热病毒导致的正常Vero细胞病变,且对Vero细胞无明显毒性作用,其对犬瘟热病毒的抑制EC50值为2.752μM。因此,霉酚酸及其衍生物在抑制犬瘟热病毒方面效果确切,可单独或与其它抗犬瘟热病毒药物组合后用于制备犬瘟热病毒抑制剂或犬瘟热病治疗药物。
20 分泌抗犬瘟热病毒H蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞2D12株
用CDV疫苗株或野毒株的中和抗原表位建立间接ELISA方法鉴别检测CDV疫苗株或野毒株产生的抗血清;将CDV野毒株中和抗原表位与犬细小病毒VP2蛋白融合表达,免疫小鼠产生的抗血清可中和CDV野毒株和犬细小病毒,可用于疫苗制备。本发明单克隆抗体2D12、中和抗原表位为CDV野毒株与疫苗株的鉴别诊断试剂盒和犬瘟热病毒疫苗研制奠定基础。
21 犬瘟热病毒纳米PCR检测试剂盒及其应用
纳米PCR检测方法只能针对犬瘟热病毒实现特异性扩增,而不能扩增犬副流感病毒、狂犬病病毒、犬冠状病毒、犬细小病毒和犬腺病毒I型II型。因此,本发明建立的纳米PCR检测方法具有快速、特异性强和灵敏度高的特点,为临床和实验室检测犬瘟热病毒提供了新的技术手段。
22 用于快速检测犬瘟热病毒的引物组、荧光可视化RT-LAMP试剂盒及方法
制备的RT‑LAMP试剂盒可实现对犬瘟热病毒的高灵敏度和高特异性检测,检测灵敏度为10copies,同时检测方法操作简便,成本较低,设备适用范围广,可用于现场快速检测核酸,及时筛查,检测结果可肉眼直接观察,不需进行电泳,荧光检测LAMP即可获知检测结果。
23 一种用于犬瘟热病毒基因检测的引物、探针及检测试剂盒
与现有技术相比降低了不同基因型RNA病毒检测的引物探针设计难度,应用本发明方法使用一套引物探针系统检测6个基因型犬瘟热病毒;极大地降低了设计难度,与目前常用的多重PCR相比,降低引物和探针间影响因素,降低检测成本,最大限度保证诊断能力,方便临床使用。
24 犬瘟热病毒CDV-3株感染性cDNA克隆及其构建方法和应用
将犬瘟热病毒CDV‑3株感染性cDNA克隆和三个辅助质粒共转染293T细胞,获得拯救后的重组CDV‑3病毒(rCDV‑3)。研究发现,获得的rCDV‑3病毒滴度最高达到107.667TCID50/mL,比wtCDV‑3高出10倍。rCDV‑3感染Vero细胞后,于感染后36h迅速达到最高病毒滴度,而wtCDV‑3于感染后72h时病毒含量达到最高。本发明的提出为犬瘟热病毒新型疫苗研制、致病机理研究奠定了基础。
25 表达犬瘟热病毒结构蛋白的重组狂犬病病毒及其应用 本发明提供一种表达犬瘟热病毒结构蛋白的重组狂犬病病毒及其应用。所述重组狂犬病病毒是以狂犬病病毒SRV9株为骨架,将犬瘟热病毒H基因以及犬瘟热病毒F基因分别插入狂犬病病毒SRV9cDNA全长的P基因和M基因之间,或者N基因与P基因之间,或者M基因与G基因之间,或者G基因与L基因之间,最后通过反向遗传操作技术拯救分别获得重组狂犬病病毒株SRV9‑CDVH和SRV9‑CDVF。将所制备的重组病毒灭活后,辅以佐剂制得表达犬瘟热病毒结构蛋白的重组狂犬病病毒灭活疫苗,免疫动物后能诱导产生相应的狂犬及犬瘟热抗体效价。本发明制备的疫苗具有理想的免疫原性、安全性高的优点。
26 一种大熊猫犬瘟热病毒的异源抗体及其制备方法
该方法通过利用来源、背景清楚的大熊猫犬瘟热病毒强毒株制备免疫用灭活疫苗,使用该灭活疫苗多次免疫健康马匹获得马的免疫血清,进一步通过盐析、酶切、层析等纯化方法,获得纯化抗体,用于大熊猫犬瘟热的预防和治疗。
27 犬瘟热、犬细小病毒病、狂犬病三联亚单位疫苗
重组犬瘟热病毒H蛋白、重组犬细小病毒VP2蛋白以及重组狂犬病病毒G蛋白都是经昆虫细胞密码子优化后的序列,其核苷酸序列分别为SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4。本发明制备的亚单位疫苗免疫犬后能够快速产生特异性抗体,可用于预防犬的犬瘟热病毒、犬细小病毒以及狂犬病病毒的感染。
28 犬腺病毒II型、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的四重实时荧光定量PCR检测
用于同时鉴别检测犬腺病毒II型、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的试剂盒。利用该试剂盒的检测操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好,不仅可以用于对犬腺病毒II型、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒进行定性鉴别检测,还可以实现准确定量,能在疫苗生产过程中的质量监控和合理化配苗中应用。
29 一种用于大熊猫犬瘟热病毒检测的引物、探针及试剂盒
旨在提高检测特异性,与犬细小病毒(CPV)、犬冠状病毒(CCV)、犬副流感病毒(CPIV)、犬轮状病毒(CRV)等其他病毒不存在交叉反应,在用于大熊猫犬瘟热病毒检测时,灵敏度高,检出限为5×101拷贝/μL,检测结果稳定可靠,与现有RT‑PCR方法具有很高的符合度,可以实现便携式的现场快速诊断。
30 一种犬瘟热病毒干燥型实时荧光PCR检测试剂
采用收集荧光信号的方式来检测样本为阳性或阴性,效率高,操作简单,并且检测结果需满足必要的条件,具有成本低廉、方便、快速及试验条件要求低的特点,不仅提高了检测效率,而且也保证了检测的精确度。
31 貉细小病毒性肠炎、犬瘟热二联灭活疫苗及其制备方法
针对貉犬瘟热、细小病毒二联活疫苗存在毒力返强风险,而市场上使用的二联灭活疫苗普遍存在貉细小病毒灭活后免疫效力较低问题,提供了一种由貉细小病毒VP2蛋白与病毒含量较高的犬瘟热病毒灭活抗原制备的二联灭活疫苗。该二联苗可同时应用于貉细小病毒性肠炎和犬瘟热两种疾病的预防,具有免疫原性好、安全性高、可控性强、培养效率和自动化程度高、可规模化生产等优势,可达到“一针两防”目的,具有广阔的应用前景。
32 一种对于犬瘟热病毒及抗体的ELISA检测方法
利用犬瘟热病毒N蛋白在制备犬瘟热检测试剂盒,其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明仅使用犬瘟热病毒的N蛋白作为抗原建立ELISA检测方法,N蛋白作为犬瘟热病毒保守蛋白具有较好的抗原性,其能够在防止病毒扩散的前提下对于血清样品中的抗犬瘟热病毒抗体进行量化,检测血液来源机体对于犬瘟热病毒的免疫状态或是细胞所分泌犬瘟热病毒的免疫水平,相比较于其他产品更为安全高效,对于犬瘟热病毒的基础研究以及临床检测具有积极意义。
33 快速检测犬瘟热病毒抗原的检测卡及其制备方法
(1)犬瘟热病毒的分离、培养、纯化;(2)抗犬瘟热病毒配对单克隆抗体的制备,包括免疫程序、细胞融合、杂交瘤筛选及克隆化、抗体制备及纯化;(3)犬瘟热病毒快速检测胶体金检测卡及其制备方法,包括样品垫处理、喷膜、C,T线确定、被测样本的处理、检测卡性能测定。本发明可以快速、灵敏、准确的定性检测国内犬瘟热病毒,克服了国内检测犬瘟热病毒胶体金检测卡开发用的配对单抗为进口原料,进口原料的单抗以某个国家分离的当前病毒制备,克服了检测过程中因地域遥远病毒变异漏检的现象。
34 一种嵌合犬瘟热病毒主要免疫基因的重组狂犬病病毒及其应用
该重组病毒是以狂犬病病毒SAD‑B19株为骨架,将SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的CDV‑F和CDV‑H基因分别插入重组质粒SAD‑19全长cDNA的N基因和P基因之间,最后通过反向遗传操作技术,拯救出重组狂犬病病毒株BNSP‑CDV‑F和BNSP‑CDV‑H。上述重组病毒BNSP‑CDV‑F和BNSP‑CDV‑H可表达犬瘟热病毒的融合蛋白和血凝素蛋白,将上述重组病毒混合制备的疫苗免疫动物后,能诱导产生较高的抗狂犬病病毒抗体与抗犬瘟热病毒主要免疫基因抗体,还可以降低疫苗成本,具有很好的推广应用前景。
35 法匹拉韦在制备抑制犬瘟热病毒增殖药物中的应用
实验结果显示,法匹拉韦(T‑705)加入到感染CDV‑3及CDV‑11的Vero及DH82细胞中,均能产生明显的病毒抑制作用,体现出良好的抗病毒功效。且随药物浓度的增加,抗病毒效果逐渐增强。细胞感染病毒后12‑48h加入药物,仍能发挥显著的抗病毒功效,证明了法匹拉韦(T‑705)暴露后用药对不同动物来源的CDV都具有很好的抑制效果。
36 犬瘟热病毒复制缺陷毒株及其构建方法
本研究所述的犬瘟热病毒流行毒株复制缺陷毒株为新型犬瘟热基因工程生物防治制剂的研制创造了便利条件及犬瘟热病毒相关基础研究提供了极佳的技术平台。
37 犬瘟热病毒弱毒疫苗株及其应用
将所分离的犬瘟热病毒在Vero细胞上传代、克隆,培育了弱毒疫苗株(HBa株),致病性试验和免疫原性试验结果表明,犬瘟热病毒HBa株对水貂和犬均不致病,且对其它来源强毒攻击可以提供很好的保护力。本弱毒疫苗株具有良好的免疫原性,可制成单苗或联苗,可有效预防由犬瘟热病毒所致疾病,还可应用于制备治疗、诊断或检测犬瘟热病毒所致疾病试剂或试剂盒。本弱毒疫苗株具有遗传性稳定,具有免疫持久、效果好、安全可靠、保存期长等优点。
38 马抗犬瘟热病毒免疫球蛋白F(ab’)2及制备方法
高效、安全、可靠的马抗犬瘟热病毒特异性精制免疫球蛋白,用于治疗犬瘟热病毒所引起的犬瘟热病毒病的有效药物,对犬瘟热病毒感染动物具有显著疗效,明显提高感染动物的存活率。本发明的制备工艺采用独特的工艺参数控制,用常规的分离法生产出所述特异性免疫球蛋白,产品安全可靠。用于制备马抗犬瘟热病毒特异性精制免疫球蛋白F(ab′)2的原料血浆有稳定高效的来源,能满足血浆的供给。
39 一种预防犬瘟热的shRNA重组腺相关病毒
预防犬瘟热的shRNA重组腺相关病毒,由AAV2/9‑N‑shRNA3质粒和辅助质粒共转染AAV‑293细胞后得到shRNA重组腺相关病毒;所述干扰片段序列的Top strand如SEQ ID NO.7所示,bottom strand如SEQ ID NO.8所示;所述AAV2/9‑N‑shRNA3质粒,由经BamHI和EcoRI双酶切的pHBAAV‑U6‑CMV‑ZsGreen载体与干扰片段基因连接、转化后构建而成,并研究AAV2/9‑N‑shRNA3对预防犬瘟热的效果。
40 一种驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法
对青年健康驴用犬瘟热灭活疫苗接种免疫,每次免疫后检测抗体滴度和中和抗体效价,当抗体滴度达到1:10000以上、中和抗体效价达到1:256以上时,静脉采血,分离血清,提取、纯化免疫球蛋白G。该方法制备所得的免疫球蛋白G可用于临床治疗犬瘟热病毒病,有效率可达100%,治愈率可达85%以上,解决了犬瘟热病毒抗血清或抗体来源不足的问题。
41 一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒
包被了犬瘟热病毒抗原的毛细管、酶标犬瘟热病毒抗原、发光底物和洗涤液。本发明灵敏度高、特异性强、线性范围宽、操作方法简便且上样量小,需要的血清样本量小。
42 一种犬瘟热、犬细小病毒检测试剂盒
犬瘟热、犬细小病毒检测试剂盒采用时间分辨检测技术,提高了检测灵敏度,能同时检测犬瘟热、犬细小两种疫病,给使用者提供了方便且降低了使用成本,检测的批间和批内差异小,性能稳定。
43 适合犬瘟热病毒和禽流感病毒增殖的MDCK-KOmavs细胞系及应用
所构建的MDCK‑KOmavs细胞系具有犬瘟热病毒和禽流感病毒感染后细胞病变快、病毒增殖滴度高、更适合犬瘟热病毒和禽流感病毒病毒增殖等特点。
44 一种犬瘟热细小病毒二联亚单位疫苗
犬瘟热细小病毒二联亚单位疫苗具有稳定的生物学特性,且具有良好的免疫原性,安全可靠,对犬瘟热强毒GN株攻毒以及犬细小病毒QN株的攻毒具有非常好的保护效果,能够有效的预防犬瘟热与细小病毒的流行和传播,降低这两种病造成的经济损失,有着广阔的应用前景。
45 用于检测检测犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状毒病毒的引物组、试剂盒及检测方法
还提供了基于所述引物组、试剂盒以及用于检测犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状毒病毒的方法。采用本发明所述的引物组、试剂盒和/或方法检测犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状毒病毒,具有特异性好、灵敏度高、准确性好、简捷高效等优点,为临床检测提供了可靠的技术手段。
46 河豚毒素在制备治疗犬瘟热的药物组合物中应用、药物组合物、制备方法及药物制剂
治疗犬瘟热的河豚毒素药物组合物的制备方法以及上述治疗犬瘟热的河豚毒素药物组合物制成的药物制剂。本发明的药物组合物含有河豚毒素,治疗效果显著,无毒副作用,不产生耐药性。
47 一种一步法定量检测犬瘟热病毒-犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒
检测犬瘟热病毒‑犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒,由抗犬IgG免疫磁珠、荧光反应液、样本处理液、洗涤液组成;其中,所述的荧光反应液为不同荧光标记的犬细小病毒抗原和犬瘟热病毒抗原溶液。本发明的检测试剂盒可快速、准确的同时鉴别诊断犬瘟热病毒抗体和犬细小病毒抗体水平,具有特异性强、灵敏度高、重复性好、操作简便等特点,具有良好的应用前景。
48 一种犬瘟热基因工程亚单位疫苗
犬瘟热亚单位疫苗具有稳定的生物学特性,且具有良好的免疫原性,安全可靠,对犬瘟热强毒GN株攻毒的水貂具有非常好的保护效果,免疫后水貂疫苗,能够有效的预防水貂犬瘟热的流行和传播,降低本病造成的经济损失,有着广阔的应用前景。
49 一种犬瘟热病毒抗体荧光检测试纸条及其制备方法和应用
试纸条具有灵敏度高、特异性强、操作简单、经济实用等优点,可实现犬瘟热病毒抗体现场快速定量检测。
50 用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的AS-PCR引物及其应用
还提供了采用所述AS‑PCR引物用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的的方法;该引物采用3端错配原则对Asia‑I型和疫苗株进行鉴别:对Asia‑I检测结果均为阳性,而疫苗株则均为阴性,能够准确区分CDV中Asia‑I和疫苗株,具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点。
51 用于检测犬瘟热病毒抗体的时间分辨荧光免疫试剂盒
试剂盒包括包被有犬瘟热病毒重组抗原的酶联板、铕标记的犬瘟热病毒重组抗原溶液、分析缓冲液,洗涤液和增强液,犬瘟热病毒重组抗原与犬瘟热病毒抗体能特异性结合。本发明试剂盒采用双抗原夹心法,检测的灵敏度和准确性更高。
52 用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的Taqman探针荧光定量PCR检测试剂盒及应用
实验证明,使用本发明建立的Taqman探针荧光定量PCR检测试剂盒检测鉴别CDV野毒株和疫苗株,灵敏度可达1个拷贝,能检测出的病毒量低至1TCID50/mL,高于常规PCR方法的103和102个拷贝,且与5种其他病原核酸检测均呈阴性。因此,使用本发明建立的试剂盒鉴别CDV野毒株和疫苗株具有特异性强、灵敏度高和稳定性好的特点,能够快速鉴别出犬瘟热病毒野毒株和疫苗株感染。
53 用于检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡与制备方法
技术要点包括底板,在底板上依次衔接有样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫,所述结合垫上设有荧光微球标记的CDV单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡IgY,所述的硝酸纤维膜设有一条包被鸡IgY的质控C线,以及一条包被CDV单克隆抗体的检测T线;属于动物疫病检测领域。
54 一种犬瘟热病毒可视化核酸检测方法
可视化快速检测方法,融合了免疫层析技术和分子生物学手段,结合LAMP扩增效率高和横向测流试纸条便于观察结果,使检测结果更具有直观性,具有可视化、快速诊断、准确等特点,解决传统检测方法操作繁琐、敏感性、特异性低的缺陷,本发明检测方法适用于临床诊断、食品安全和动物疾病检测等领域。
55 用于犬瘟热病毒检测的引物和探针及其用途
引物和探针特异性强,仅对犬瘟热病毒检测呈阳性,对其它病毒均呈阴性,灵敏度高,检出限为9.4×101拷贝。本发明方法可以有效应用于犬瘟热疫情的现场诊断,操作简单,反应时间短,对于经济欠发达地区装备较差的实验室,对于犬瘟热疫情现场和野外现场诊断中,将具有非常光明的应用前景。
56 貉犬瘟热活疫苗及其制备方法和应用
该弱毒疫苗株是本发明发明人通过貉体连续传代的方式,从犬瘟热疫苗株CDV‑O2中驯化获得的一株对貉安全、免疫原性良好、滴度稳定的犬瘟热弱毒疫苗株,命名为CDV‑OR12株,其微生物保藏号为CGMCC NO.13793。实验证明,该疫苗可有效保护貉免于犬瘟热病毒强毒的攻击,保护率在90%以上,能够有效预防貉犬瘟热的发生,免疫期为6个月。本发明的提出为貉犬瘟热的防控提供了一种新的技术手段。
57 预防或治疗犬瘟热的寡聚核酸组合及其应用
提供的寡聚核酸组合的应用为如下任一种:(b1)抑制犬瘟热病毒核酸复制;(b2)制备用于治疗犬瘟热的药物;(b3)抑制犬瘟热病毒生长;(b4)制备用于预防犬瘟热发生或传播的药物的药物;(b5)促进犬瘟热病毒死亡或灭活。实验证明,利用本发明提供的寡聚核酸组合,可抑制犬瘟热病毒复制,对预防或治疗犬瘟热具有重要的应用价值。
58 一种分泌抗犬瘟热病毒H蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞3B5株
比单独使用3B5、1D7、2G3的中和效价提高8‑32倍中和病毒能力,单克隆抗体组合治疗剂的临床应用试验结果比联合使用单克隆抗体1D7和2G3效果从98%提高到100%,治疗周期从4天缩短为2天。可用于犬瘟热(CD)发病动物的临床治疗,降低生产成本,提高治疗效果。
59 基于水貂源Nectin4受体的犬瘟热病毒敏感细胞系、制备方法和应用
基于水貂源Nectin4受体的犬瘟热病毒敏感细胞系,保藏编号为CGMCC NO.17413。该细胞系为可以稳定表达水貂源Nectin4基因的Vero细胞系,细胞的犬瘟热病毒敏感性更好,分离的病毒效价稳定,不会发生适应性突变和毒力致弱的问题。本发明提供的制备方法,将含有优化水貂源Nectin4基因的转基因载体引入宿主细胞,筛选得到表达水貂源Nectin4受体的犬瘟热病毒敏感细胞系,其中,所用优化水貂源Nectin4基因的序列如SEQ ID NO.1所示。该方法操作简便,安全性高。
60 一种基于BTNAA体系检测犬瘟热病毒的引物对、引物和探针组合物、试剂及试剂盒
具有在具备温控功能的荧光检测仪器中,在42℃等温条件下对犬瘟热病毒进行快速、实时、灵敏、准确、便捷的检测的优点。本发明相比传统PCR法更为便捷、快速,在没有实验室条件的宠物店、小型宠物诊所做到对犬瘟热病毒进行便捷、快速和精确的检测。
61 犬瘟热病毒荧光EMA检测引物组、试剂盒和检测方法
所述检测包含使用所述试剂盒进行常温核酸扩增技术,通过M‑MLV逆转录酶、Rnase抑制剂、DNA解旋酶、单链DNA结合蛋白、DNA聚合酶等多个酶促反应,可在37‑45℃恒温条件下,10‑30分钟内使待检RNA逆转录成cDNA,并将cDNA扩增数百万倍,配合荧光检测技术,可以实现对待检RNA的快速检定。本发明操作简单、时间短、仪器要求低,适合用于宠物传染性疾病的快速诊断。
62 一种用微载体悬浮培养犬瘟热病毒的方法
与传统的转瓶培养繁殖病毒的工艺相比,自动化程度较高,生产时可控,节省人力,降低成本,生产用地少,规模易于扩大,生产病毒滴度高,批间差异小,产品质量稳定。
63 犬瘟热病毒抗体快速定量检测卡及使用方法
所述硝酸纤维素膜上包被犬瘟热病毒H蛋白抗原为检测线,包被兔抗鸡lgY抗体为质控线,标记物为标记有犬瘟热病毒结构蛋白H蛋白重组抗原的荧光检测微球和标记鸡lgY抗体的荧光质控微球。本发明可实现犬瘟热病毒抗体现场快速定量检测,具有较高的实用价值和推广价值。
64 一种制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物的方法、抗原蛋白复合物及其应用
用低血清培养基悬浮VeroE6‑TY株细胞培养驯化水貂犬瘟热病毒,驯化后的病毒接种到低血清悬浮VeroE6‑TY株细胞培养液中,培养增殖后收获毒液,制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物。本发明使得水貂犬瘟热抗原蛋白复合物实现了从转瓶贴壁培养向大规模细胞悬浮培养的转变,这不仅简化了生产工艺,降低了生产成本,还大大提高了产品的产量和质量。